孫建濤 薛素強(qiáng) 潘金金 張青林
（廣州市華南農(nóng)大生物藥品有限公司 技術(shù)服務(wù)部）
伴隨家禽養(yǎng)殖規(guī)模不斷擴(kuò)大、集約化程度越來越高帶來的結(jié)果就是家禽活動(dòng)空間的相對(duì)減少以及環(huán)境性致病菌危害越來越大。當(dāng)前環(huán)境中的條件性致病菌的危害已經(jīng)成為家禽養(yǎng)殖業(yè)不可忽視的重要一部分。而沙門氏菌作為一種常見致病菌, 其既可通過垂直傳播感染也可通過污染的飼料、器具、飲水等進(jìn)行水平傳播，其帶來的危害越來越嚴(yán)重。筆者在臨床中遇到1例由沙門氏菌引發(fā)的黃羽肉雞60天齡感染發(fā)病的病例, 現(xiàn)報(bào)道如下：
2015年3月16日，廣東江門地區(qū)一養(yǎng)殖戶在林中飼養(yǎng)的20000 只三黃雞發(fā)生以精神沉郁、食欲減退、腹瀉、消瘦和零星死亡為主要癥狀的疾病，至3月20日已死亡200只。該群肉雞1-3日齡，投喂開口藥鹽酸環(huán)丙沙星飲水；5日齡免疫新支二聯(lián)弱毒苗和新支流滅活油乳苗；10日齡法氏囊飲水；12日齡免疫H5（Re-6+Re-7）滅活油乳苗；25日齡免疫H5（Re-6+Re-7）滅活油乳苗和新流二聯(lián)滅活油乳苗；60日齡免疫H5（Re-6+Re-7）滅活油乳苗。雞群開始發(fā)病時(shí)采用硫酸新霉素+強(qiáng)力霉素進(jìn)行治療，無明顯效果；截止就診時(shí)，雞群病程約4d，死亡200余只。養(yǎng)殖戶使用常用的多種抗生素效果微乎其微，病情無法控制，遂進(jìn)行診治。
1.臨床表現(xiàn)：病雞發(fā)病日齡60d，病雞精神沉郁，采食量減退，消瘦，胸骨彎曲，行動(dòng)遲緩，癱瘓，雙翅下垂，縮頭閉目，羽毛松亂，嚴(yán)重腹瀉，起初排黃白色糊狀糞便，繼而排水樣稀糞，肛門周圍被糞便污染，呈綠色糊狀污穢，后期多因因衰竭而死亡。
2.剖檢變化：剖檢病死雞30 只，病雞心冠有出血斑點(diǎn)、表面有大量白色結(jié)節(jié)，肝臟腫大、褪色，質(zhì)脆易碎，偶見菜花樣大壞死灶區(qū)，少數(shù)病例肝臟破裂，腹腔積有血塊，脾臟腫大、有壞死結(jié)節(jié)呈斑駁狀，肌胃表面有白色結(jié)節(jié)，腎臟淤血，腸道黏膜出血，有的腸黏膜脫落。
3.實(shí)驗(yàn)室診斷
3.1 細(xì)菌分離培養(yǎng)：無菌采集病雞肝臟，用接種環(huán)劃線于SS瓊脂培養(yǎng)基表面，置37oC溫箱培養(yǎng)24h，培養(yǎng)基表面長(zhǎng)出無色半透明，中心黑色或幾乎全部黑色的菌苔，該生長(zhǎng)特性與沙門氏菌的培養(yǎng)特性基本一致。然后再挑取單個(gè)菌落作進(jìn)一步純化培養(yǎng)，取純化培養(yǎng)菌進(jìn)行革蘭氏染色, 挑取少許菌落在玻片上用生理鹽水稀釋，將涂片在火焰上固定，滴加結(jié)晶紫染色液染1min，水洗；滴加革蘭氏碘液作用1min，水洗；滴加脫色酒精，約30秒，水洗；滴加沙黃復(fù)染液，復(fù)染1min，水洗，干后鏡檢。革蘭氏陽(yáng)性菌呈紫色；革蘭氏陰性菌呈紅色
3.2 生化特性試驗(yàn)：用無菌接種環(huán)鉤取純化后的單個(gè)菌接種到微量發(fā)酵管內(nèi), 倒置管放37 ℃溫箱, 觀察2天。
3.3 藥敏試驗(yàn) 選擇14 種臨床常見抗菌藥物藥敏片, 在LB瓊脂平板上采用藥敏紙片擴(kuò)散法操作,37 ℃培養(yǎng)24h 觀察結(jié)果。判定標(biāo)準(zhǔn)為：藥物抑菌圈直徑>20 mm 為高敏，15 ～ 20 mm 為中敏，10 ～15 mm 為低敏，<10 mm 為不敏感。
3.4 病毒的分離鑒定 取發(fā)病雞的肝臟、脾臟、胰腺進(jìn)行研磨, 加PBS稀釋后制成懸液，反復(fù)凍融三次；7000轉(zhuǎn)/分，離心15min；加入1萬單位過濾好的抗生素；加入抗生素后置4℃作用1.5小時(shí)；7000轉(zhuǎn)/分，離心15min；每胚0.2ml，接種10-11天齡SPF雞胚。收獲胚液進(jìn)行HA檢測(cè)，對(duì)HA陽(yáng)性樣品進(jìn)行特異性檢測(cè)；HA陰性者，將胚液繼續(xù)接種雞胚盲傳，至少盲傳至F3代。接種后雞胚繼續(xù)放在溫箱中孵育,每隔24 h 觀察雞胚情況。
4.結(jié)果
4.1 病毒分離 HA陰性，也未出現(xiàn)死胚及其他異常現(xiàn)象,所接種雞胚144小時(shí)后仍全部存活, 這樣就排除該雞群發(fā)病由病毒引起的可能性。
4.2 細(xì)菌分離 在SS瓊脂平板上分離所得菌落較純, 細(xì)菌菌落光滑、細(xì)小，在自然光下呈藍(lán)灰色或灰白色閃光，整齊均一。革蘭氏染色鏡檢呈陰性細(xì)長(zhǎng)桿菌，沒有芽孢，有聚集，偶見兩個(gè)或多個(gè)連在一起。
4.3 藥敏試驗(yàn)
表1 藥敏試驗(yàn)結(jié)果
藥物 不敏 低敏 中敏 高敏 抑菌圈直徑
慶大霉素 √ 20
頭孢呋辛 √ 27
四環(huán)素 √ 10
頭孢曲松 √ 12
多粘菌素B √ 17
卡那霉素 √ 19
諾氟沙星 √ 15
左氟沙星 √ 10
頭孢噻肟 √ 22
青霉素G √ 0
氯霉素 √ 0
阿米卡星 √ 10
復(fù)方新諾明 √ 0
5．治療
從藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果來看，該菌對(duì)頭孢類高度敏感，對(duì)氨基糖苷類藥物和多粘菌素B中度敏感，對(duì)頭孢曲松、四環(huán)素、諾氟沙星、阿米卡星、左氟沙星、復(fù)方新諾明、氯霉素、青霉素G、復(fù)方新諾明等不敏感或耐藥。因此建議該養(yǎng)殖戶馬上采取如下措施：全群飲水中添加硫酸安普霉素可溶性粉，同時(shí)添加葡萄糖和口服補(bǔ)液鹽，連續(xù)飲用4d，并緊急注射頭孢噻呋鈉；用藥后第3天，雞群采食量明顯上升，死亡逐漸減少，精神逐漸恢復(fù)正常，病情得到控制。
6.體會(huì)
6.1 肉雞沙門氏菌病的發(fā)生，多與養(yǎng)殖環(huán)境差相關(guān)，南方黃羽雞飼養(yǎng)多數(shù)都在林間飼養(yǎng)，受場(chǎng)地衛(wèi)生條件和氣候變化影響比較大，還與飼料、飲水不潔有關(guān)，因此要預(yù)防本病，必須加強(qiáng)雞場(chǎng)的飼養(yǎng)管理和環(huán)境衛(wèi)生，保持飼料和飲水的清潔衛(wèi)生。沙門氏菌要做好如下防控：1.種源凈化：沙門氏菌是垂直傳播性疾病，做好種禽的防疫工作尤為重要！種禽的健康直接關(guān)乎肉雞的健康，因此要做好源頭的防控工作。2.流通環(huán)節(jié)：禽苗在運(yùn)輸過程中也要注意器具、車輛的消毒衛(wèi)生，嚴(yán)防細(xì)菌滋生蔓延！3.養(yǎng)殖環(huán)節(jié)：1d齡開口藥的預(yù)防工作也要做好，選用合適的抗生素進(jìn)行預(yù)防，譬如頭孢類抗生素等的飲水、注射等；環(huán)境場(chǎng)地的衛(wèi)生消毒工作；定期的預(yù)防性用藥，掌握好疾病發(fā)生規(guī)律，定期選擇性投藥。
6.2 合理的用藥：當(dāng)前沙門氏菌病的治療由于其在臨床上用藥的不合理性造成菌株耐藥性的不斷增加，現(xiàn)有的廣譜抗生素和抗革蘭氏陰性菌的抗生素的效果越來越差。本病例在發(fā)病過程中，曾使用左氟沙星、阿米卡星、強(qiáng)力霉素和氟苯尼考等多種臨床常用藥物，但治療效果均不理想。因此選擇藥物要合理，要選擇療效確切、毒副作用少、使用途徑方便及價(jià)格低廉并且配伍禁忌少的藥物，同時(shí)要注意聯(lián)合用藥，選擇協(xié)同作用強(qiáng)的藥物組合。要密切用藥后群體的反應(yīng)情況，做好記錄等。
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